Nu har vi både resultaten från PCR och gelelektrofores som vi kan jämföra nedan.
Brunn 1 visar den oklyvda plasmiden: I elektroforesen ser vi att ett tjock band har bildas , medan i membranet ser vi inte bara det tjocka bandet utom andra små band som ligger längs upp. dessa små band är också plasmid som har vandrat genom gelen olika fort eftersom plasmiden har olika former.
Brunn2 visar den klyvda plasmiden (konc.0,5 mikrog./mikrol.): I både elektroforesen och membranet syns det Två band, ett stor band uppe som är vektorn och en mindre band nere som är insert (LL-37). Orsaken till att vektorn har ett tjockare band än insert är att det finns fortfarande en mängd av LL37 kvar i vektorn.
Brun 3 visar markören IX: I elektroforesen ser vi markören, men inte i membranet p.g.a den binder inte till prober.
Brunn 4 visar den klyvda pasmiden (konc. 0,005 mikrog./mikrol.): I membranet ser vi vektor (högst upp) och insert (längs ner). De är i samma höjden som vektor och insert av den klyvda plasmiden med konc. 0,5 mikrog./mikrol. I elektroforesen ser vi bara vektorn.
Bredvid brunn 4 i membranet ser vi ett svag band, det är prov som läckte från brunn 4.
Med det resultatet har vi påvisat igen att LL37 fanns i provet.
Nu har vi jobbat med både Southern och PCR, och det som vi kan konstatera är att PCR är en mycket snabbare metod än Southern. Detta är en fördel när man vill ha en snabb svar på provet. Men Southern är en känsligare metod som gör det möjligt att laborera med väldig små substans mängder, vilket är också en fördel.
Under laborationen har jag lärt mig mycket, framför allt att planera laborationen med hjälp av flödesschema. Detta hjälper oss att ha en bättre kontroll av alla momenten som ingår i en laboration.
Hej Diana!
SvaraRaderaJag kan de att ni jobbade hård och ni fick bra resultat, men jag bara undrar om membrans bild har ni gjorde prehybridisering innan hybridisering?? Eftersom jag ser fem brunnar eller kanske jag se fel!! Min fråga om ni inte har gjort prehybridisering till membranet vad ska bli resultaten??
Vänliga hälsningar
Ali AZeez
Hej Diana!
SvaraRaderaDu har gjort en bra tolkning av dina resultat! Det enda jag inte håller med om är att Southern är en känsligare metod än PCR. När ni är ovana att pipettera små mängder, kan det vara svårt att jämföra vilken metod som är känsligast. Vi har jämfört samma koncentration i bägge metoderna och i båda såg du ett tydligt band som visar att LL 37-genen fanns i plasmiden. Om man har en optimerad PCR är den betydligt känsligare än Southern.
Kan du se någon nackdel med PCR?
Märit